日期:[2024年07月29日]
-- 智慧生活报 --
版次:[A10]
病理科不一样的“FISH”
众所周知，fish是鱼的英文单词。可是，病理科有一种特殊的“FISH”，既不能养殖，也不能吃。那么，它到底是干什么的呢？它是病理科一项新兴前沿的分子病理检查技术——荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH），用于检测和定位细胞中的特定DNA序列或染色体区域。
1、FISH是什么？
FISH技术的基本原理是利用碱基互补配对的原则，通过将荧光标记的单链DNA核酸探针与待测样本中的DNA进行杂交，并将结果可视化的过程。然后，医技人员利用荧光显微镜直接观察?标序列在细胞核、染?体或切?组织中的分布情况，以此识别特定基因或染色体区域的情况。形象地说，医技人员就是用核酸“钓鱼”。他们用荧光标记的核酸探针做“鱼饵”，放入要检测的样本中，和目标基因的另一半配对，从而“钓”出相对应的“目标基因”。
2、怎样抓到“鱼”——FISH的实现过程
下面，我们来看看这“鱼”是怎么捕捉到的！这个过程主要包括：样本准备及前处理、酶消化、变性、杂交、洗涤、复染、显微镜下观察分析。
①样本准备及前处理：组织学样本和细胞学样本的前处理不一样。组织样本切片厚3μm左右，60℃烤片4小时或过夜，接着脱蜡、热修复，之后待下一步处理。而细胞学样本则是经过离心、去除杂质等处理，收集目标细胞，经低渗和固定处理之后，取细胞样本5—10μl滴片，60℃烤片2小时左右，即可进行下一步处理。
②样本前处理之后，组织学或细胞学样本都需要用酶对组织细胞进行消化。酶处理的目的是消化细胞间质及细胞核周围的蛋白质，使蛋白质结构变得疏松，以利于带荧光标识的探针进入细胞核内和待测DNA进行杂交。
③变性、杂交：医技人员在载有组织或细胞的预处理好的玻片上，滴加带荧光标记的探针，使用杂交仪器，80℃—90℃变性5分钟，37℃—42℃杂交17—20小时，使细胞核内的DNA或RNA核酸双链打开，然后和带荧光标记的特定单链探针结合，再形成带荧光标记的稳定的双链DNA或RNA。需要注意的是，变性和杂交需要在避光的情况下完成。
④洗涤：医技人员使用浓度从高到低的溶液对玻片进行充分洗涤，以便去除未结合的探针，使片内背景变得清晰。
⑤最后，医技人员加入DAPI对组织细胞进行复染，以增强荧光信号或确认细胞结构。然后，医技人员把玻片放到荧光显微镜下就可以观察了，“鱼”也终于到手了。
整个过程既繁琐又复杂，技术要求高。至此，你知道为什么FISH检查需要那么长时间才能出报告了吧？
3、FISH的优势
①FISH不需要放射性同位素标记，经济安全。
②FISH具有高度特异性，灵敏性高，探针稳定性高，定位准确。
③可视化：结果显微镜下清晰可辨，且多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色，可同时检测多种序列。
④既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化。也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。
4、“鱼”的作用——FISH的应用
根据探针的类型，医技人员可以用不同的探针检测染色体异常/基因的扩增、缺失、断裂和融合。FISH技术将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA核酸探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的诊断、治疗和预后评估起着重要的作用。
FISH可以指导临床治疗用药。比如，乳腺癌HER-2 FISH检查为阳性，提示靶向药物赫赛汀治疗获益，可使用紫杉醇化疗和高强度蒽环类药物方案；肺癌ALK检查阳性，可考虑靶向药物克唑替尼治疗。而检测出NTRK基因融合的实体瘤患者可靶向用药恩曲替尼或拉罗替尼。
FISH可以辅助诊断。FISH为明确软组织肿瘤、儿童实体瘤、淋巴造血系统肿瘤等疾病的病理诊断提供依据，如MDM2辅助诊断高分化脂肪肉瘤、SS18辅助诊断滑膜肉瘤 、EWSR1辅助诊断尤因肉瘤，而BCL6/IGH辅助诊断弥漫大B淋巴瘤等；又例如，1p和19q共缺失可用于鉴别诊断少突胶质细胞瘤；DDIT3可以鉴别诊断黏液样脂肪肉瘤/圆形细胞脂肪肉瘤；PRCC/TFE3诊断Xp11.2 易位型肾细胞癌。
FISH可以判断预后。HER2基因扩增的患者预后差，无病生存和总生存期缩短，淋巴结转移率高，复发风险高；如大B细胞淋巴瘤中，MYC与BCL2同时断裂重排为双打击淋巴瘤，预后差，而BCL6阳性的病例却预后较好；神经母细胞瘤N-MYC扩增者预后差。
总而言之，FISH技术具有安全、快速、灵敏度高等优势，可实现多色标记，简单直观。在肿瘤的精准诊断、个性化治疗以及判断预后等方面都起到越来越重要的作用，应用也越来越广泛。
陈晓童 玉林市第一人民医院
1、FISH是什么？
FISH技术的基本原理是利用碱基互补配对的原则，通过将荧光标记的单链DNA核酸探针与待测样本中的DNA进行杂交，并将结果可视化的过程。然后，医技人员利用荧光显微镜直接观察?标序列在细胞核、染?体或切?组织中的分布情况，以此识别特定基因或染色体区域的情况。形象地说，医技人员就是用核酸“钓鱼”。他们用荧光标记的核酸探针做“鱼饵”，放入要检测的样本中，和目标基因的另一半配对，从而“钓”出相对应的“目标基因”。
2、怎样抓到“鱼”——FISH的实现过程
下面，我们来看看这“鱼”是怎么捕捉到的！这个过程主要包括：样本准备及前处理、酶消化、变性、杂交、洗涤、复染、显微镜下观察分析。
①样本准备及前处理：组织学样本和细胞学样本的前处理不一样。组织样本切片厚3μm左右，60℃烤片4小时或过夜，接着脱蜡、热修复，之后待下一步处理。而细胞学样本则是经过离心、去除杂质等处理，收集目标细胞，经低渗和固定处理之后，取细胞样本5—10μl滴片，60℃烤片2小时左右，即可进行下一步处理。
②样本前处理之后，组织学或细胞学样本都需要用酶对组织细胞进行消化。酶处理的目的是消化细胞间质及细胞核周围的蛋白质，使蛋白质结构变得疏松，以利于带荧光标识的探针进入细胞核内和待测DNA进行杂交。
③变性、杂交：医技人员在载有组织或细胞的预处理好的玻片上，滴加带荧光标记的探针，使用杂交仪器，80℃—90℃变性5分钟，37℃—42℃杂交17—20小时，使细胞核内的DNA或RNA核酸双链打开，然后和带荧光标记的特定单链探针结合，再形成带荧光标记的稳定的双链DNA或RNA。需要注意的是，变性和杂交需要在避光的情况下完成。
④洗涤：医技人员使用浓度从高到低的溶液对玻片进行充分洗涤，以便去除未结合的探针，使片内背景变得清晰。
⑤最后，医技人员加入DAPI对组织细胞进行复染，以增强荧光信号或确认细胞结构。然后，医技人员把玻片放到荧光显微镜下就可以观察了，“鱼”也终于到手了。
整个过程既繁琐又复杂，技术要求高。至此，你知道为什么FISH检查需要那么长时间才能出报告了吧？
3、FISH的优势
①FISH不需要放射性同位素标记，经济安全。
②FISH具有高度特异性，灵敏性高，探针稳定性高，定位准确。
③可视化：结果显微镜下清晰可辨，且多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色，可同时检测多种序列。
④既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化。也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。
4、“鱼”的作用——FISH的应用
根据探针的类型，医技人员可以用不同的探针检测染色体异常/基因的扩增、缺失、断裂和融合。FISH技术将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA核酸探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的诊断、治疗和预后评估起着重要的作用。
FISH可以指导临床治疗用药。比如，乳腺癌HER-2 FISH检查为阳性，提示靶向药物赫赛汀治疗获益，可使用紫杉醇化疗和高强度蒽环类药物方案；肺癌ALK检查阳性，可考虑靶向药物克唑替尼治疗。而检测出NTRK基因融合的实体瘤患者可靶向用药恩曲替尼或拉罗替尼。
FISH可以辅助诊断。FISH为明确软组织肿瘤、儿童实体瘤、淋巴造血系统肿瘤等疾病的病理诊断提供依据，如MDM2辅助诊断高分化脂肪肉瘤、SS18辅助诊断滑膜肉瘤 、EWSR1辅助诊断尤因肉瘤，而BCL6/IGH辅助诊断弥漫大B淋巴瘤等；又例如，1p和19q共缺失可用于鉴别诊断少突胶质细胞瘤；DDIT3可以鉴别诊断黏液样脂肪肉瘤/圆形细胞脂肪肉瘤；PRCC/TFE3诊断Xp11.2 易位型肾细胞癌。
FISH可以判断预后。HER2基因扩增的患者预后差，无病生存和总生存期缩短，淋巴结转移率高，复发风险高；如大B细胞淋巴瘤中，MYC与BCL2同时断裂重排为双打击淋巴瘤，预后差，而BCL6阳性的病例却预后较好；神经母细胞瘤N-MYC扩增者预后差。
总而言之，FISH技术具有安全、快速、灵敏度高等优势，可实现多色标记，简单直观。在肿瘤的精准诊断、个性化治疗以及判断预后等方面都起到越来越重要的作用，应用也越来越广泛。
陈晓童 玉林市第一人民医院
